ДНК-анализ ПЦР

Полимеразная цепная реакция — экспериментальный метод, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты в биологическом материале (пробе).

ДНК

загрузка...

Компоненты реакции

Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) — генетическая информации присущая всем живым организмам. Каждая нить состоит из соединенных последовательно нуклеотидов, закрученных в спираль. Важным свойством ДНК является ее способность удваиваться.
Строение ДНК

Описание процесса образования дочерней нити включает в себя следующие этапы:

  • расплетение и расхождение нитей;
  • присоединение олигонуклеотидов;
  • достраивание цепи.

В результате, образуется ДНК, аналогичная материнской. Главную роль в образовании копий ее участков играют праймеры — короткие фрагменты нуклеиновой кислоты. Именно правильный их подбор, обеспечивает специфичность и чувствительность полимеразной цепной реакции. Он должен присутствовать только у исследуемого микроорганизма или гена. Синтез элементов с необходимой последовательностью нуклеотидов, осуществляется в автоматических синтезаторах.

Области применения

Полимеразная цепная реакция получила широкое применение не только в медицине, но и ветеринарии, микробиологии. А также:

  • в судебно-медицинской практике (идентификация личности);
  • для контроля состояния окружающей среды (поиск патогенных бактерий в почве, воде, воздухе);
  • в археологии (идентификация вымерших видов растений, животных насекомых и т.д.)
  • во многих других направлениях, где требуется определение наличия искомого объекта.

Забор анализа проводится в специализированных процедурных кабинетах.

Материалы для исследования

Название Количество Способ забора Цель диагностики Примечание
 Соскобы со слизистых
— из уретры у мужчин;

— из уретры у женщин;

— из цервикального канала;

— со слизистых зева и дыхательных путей;

— из конъюнктивы.

 — У мужчин зонд вводят в уретру на глубину 4 см.

У женщин зонд вводят в уретру на глубину 1 см.

Для взятия образца из цервикального канала предварительно удаляют слизь с помощью стерильного ватного тампона, затем отбирают биоматериал на глубине 0,5-1 см.

В остальных случаях зондом проводят 1-2 раза по слизистым в месте локализации инфекционного процесса.

Обнаружение заболеваний передающихся половым путем и поражающих слизистые оболочки. Отбор проб проводится вращательными движениями стерильным зондом. Нельзя допускать попадание крови в исследуемый материал. За 1,5-2 часа до исследования не ходить в туалет.
Моча 50 мл В стерильный контейнер. Инфекционный процесс в мочеполовом тракте. Собирается первая порция утренней мочи.
Мокрота 15-20 мл В стерильную одноразовую емкость. — туберкулез;

— респираторные формы хламидиоза и микоплазмоза.

Кровь 1-1,5 мл венозной крови В стерильную пробирку с раствором цитрата натрия. — вирус гепатитов B, C, D, G;

— герпес;

— цитомегаловирусная инфекция;

— вирус иммунодефицита;

— исследование генов.

Анализ сдается натощак.
Биологические жидкости (плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная, секрет предстательной железы и слюна). 0,1-1,0 мл В стерильные розовые пробирки, с плотно закрывающимися крышками. По показаниям.  —
Биологические ткани желудка и 12-перстной кишки 2-3 мм В стерильные одноразовые пробирки, с плотно закрывающимися крышками. Хеликобактерная инфекция. Биопсия.

Подготовка к сдаче анализов

Чтобы правильно сдать анализ необходимо знать правила подготовки к нему:

  • Мужчинам за 3 часа до сдачи спермы на анализ нельзя мочиться, а также в течение 3 дней не следует посещать баню, не есть острую пищу, не употреблять спиртные напитки и не вступать в половую связь.
  • За 4 часа до взятия на анализ слюны нельзя кушать и принимать лекарства.
  • Перед сдачей мочи необходимо провести туалет наружных половых органов.
  • У женщин во время менструации анализ не берется.
  • При сдаче урогенитального мазка необходимо соблюдать следующие рекомендации: за 2 недели до взятия пробы по возможности (посоветовавшись с врачом) отказаться от приема антибактериальных препаратов, за неделю не делать спринцеваний, не использовать вагинальные смазки и свечи, за 3 часа не посещать туалет.

Преимущества

Достоинством ПЦР является:

  • Точно определяет наличие или отсутствие возбудителя.
  • Выявляет генетический материал, характерный только для конкретного микроорганизма.
  • Позволяет определить даже минимальное количество бактерий или вирусов.
  • Для исследований могут быть использованы различные материалы.
  • Выдача результатов в короткий срок — от нескольких часов.
  • Обнаружение возбудителя на любой стадии заболевания.
  • Получение высоких достоверных результатов.

Хранение биоматериала

Время от взятия крови до получения плазмы не должно быть более 6 часов.

Взятые образцы могут храниться при комнатной температуре не больше 2 часов, в холодильнике до суток при температуре 2-8°С. Более длительный период хранения возможен, но только в морозильной камере. Повторного замораживания после разморозки не допускается. Транспортируют биоматериал только в специальных контейнерах.

Лабораторный холодильник

Назначение

Анализ проводят в ряде случаев: при подозрении на заболевание вирусной или бактериальной природы, грибковые патологии, для диагностики недугов передающихся половым путем (хламидиоз, трихоманиаз, уреаплазмоз, сифилис, гонорея и прочие), ВИЧ, глистные инвазии, лямблиоз, для онкодиагностики, для оценки эффективности проводимой терапии, подозрение на неонатальные инфекции, идентификация личности, исследование донорской крови и другое.

В современной медицине с помощью анализа ПЦР, определяют тест на отцовство.

Каждая нить ДНК имеет две альтернативные формы (аллели) одна из которых наследуется от биологической матери, другая от отца. Это означает, что по 50% генетического материала от каждого родителя. По совпадению локусов определяют генетическое родство. Точность полученных результатов очень высокая и повторная сдача не требуется. Чаще всего для анализа используется буккальный эпителий, но также можно использовать кровь, слюну волосы, ногти и другие биоматериалы, при этом точность анализа не зависит от выбора образца.

Для взятия эпителия подготовка не нужна, при сдаче крови, нужно воздержаться от приема алкоголя, жирной пищи и сдавать натощак. Эпителий из полости рта берется стерильной ватной палочкой в течение 10 секунд, затем кладется в конверт и отправляется на исследование. В лаборатории из взятого материала выделяют ДНК, затем с помощью необходимых реагентов копируется. Полученные материалы отца и предполагаемого ребенка сравниваются, путем изучения участков хромосом, занятых одним геном. Совпадение локусов говорит об отцовстве, а их отсутствие об исключении биологического родства. При этом родство отца и ребенка никогда не устанавливается, как 100%.

Ограничения способа

Существуют и недостатки такого метода исследования:

  • Происходит увеличение участков дезоксирибонуклеиновой кислоты как в живом, так в погибшем микроорганизме, так что требуется контрольное проведение анализа после полной элиминации возбудителя.
  • Возможность ложноположительного результата из-за наличия живых организмов другого вида, но с таким же генетическим фрагментом.
  • Возможная изменчивость генотипа исследуемого возбудителя, вследствие чего, он не определяется в ходе реакции.

Расшифровка результатов

Результаты реакции в качественном отношении могут быть двух видов: при обнаружении искомого возбудителя в бланке, будет указано — обнаружено, при его отсутствии — не обнаружено.

Количественная оценка результата анализа позволяет определить:

  • количество возбудителя находящегося в исследуемом материале;
  • эффективность терапии;
  • развитие устойчивости к препаратам;
  • интенсивности развития заболевания.

загрузка...

Это будет Вам интересно:

загрузка...
Понравилась статья? Поделиться с друзьями: